Manitol sol agara ili manitola sol krutina medij selektivan i diferencijal kulture. Chapman ga je stvorio za izolaciju patogenih gram-pozitivnih koka, posebno Staphylococcus aureus.
Međutim, korisno je izdvojiti i Staphylococus epidermidis, koji ponekad može biti prisutan kao oportunistički patogen, i Staphylococcus saprophyticus, prepoznati mokraćni patogen, između ostalih vrsta.
A. Fiola s pripremljenim sredstvom za slani manitol agar. B. Ploče slanog manitola agar zasađene fermentirajućim i ne-fermentirajućim bakterijskim sojevima manitola. Izvor: A i B: Fotografije snimio autor MSc. Marielsa Gil.
Neki enterokoki mogu rasti na ovom mediju, kao i određeni Gram-pozitivni štapići koji stvaraju spore.
Ovaj je medij vrlo koristan u analizi kliničkih uzoraka, ali se također koristi u mikrobiološkom istraživanju hrane i kontroli kvalitete industrijskih proizvoda, poput kozmetike, lijekova, među ostalim.
Slani manitol-agar sastoji se od ekstrakata i peptona iz govedine, tripteina, manitola, natrijevog klorida, fenola crvenog i agara.
osnova
Manitol agar je selektivan zahvaljujući visokoj koncentraciji soli. Slanost djeluje kao inhibirajuća tvar i sprečava rast Gram negativnih bakterija.
Razlika je također i zbog prisutnosti ugljikohidratnog manitola i fenolno-crvenog pH pokazatelja. Iz toga bakterije sposobne fermentirati manitol stvaraju kiseline, zakisuju medij, pretvarajući kolonije i medij u žutu boju.
S druge strane, kolonije koje ne fermentiraju manitol rastu u mediju uzimajući hranjive tvari koje dobivaju ekstrakti i peptoni mesa i tripteina. Odatle bakterije izvlače ugljik, dušik, vitamine i minerale potrebne za njihov rast.
Kolonije u ovom slučaju mogu biti slabe ili jake ružičaste boje, a medij ostaje iste boje ili se mijenja u fuksiju.
Agar je tvar koja pruža konzistenciju mediju.
priprema
Za pripremu litre slanog manitarskog agara, 111 g dehidriranog medija pogodnog komercijalnog poduzeća izvaga se i otopi u 1000 ml destilirane vode pomoću tikvice.
Za poboljšavanje postupka otapanja primjenjuje se toplina uz često miješanje medija. Prokuhajte minutu.
Tikvica se stavi u autoklav na 121 ° C tokom 15 minuta.
Na kraju vremena izvadite bočicu iz autoklava, ostavite je da se odmori i poslužite između 15 i 20 ml na sterilnim Petrijevim posudama kada je temperatura približno 50 do 55 ° C.
Omogućuje se skrućivanje, naručivanje na obrnuti način u ploče i čuvanje u hladnjaku do upotrebe. Prije sadnje uzorka, pričekajte da ploča dosegne sobnu temperaturu.
Ploče se sjeme obaranjem ili površinskim setvom drigalskim lopaticom. Konačni pH pripremljenog medija mora biti 7,4 ± 0,2
Boja dehidriranog medija je svijetlo bež, a boja pripremljenog medija je narančasto crvena.
Prijave
Zbog velike selektivnosti, ovaj je medij idealan za sjetvu uzoraka miješane flore u kojima se traži prisustvo Staphylococus aureus, kao glavnog patogena ovog roda.
U tom smislu, jedna od njegovih najčešćih primjena je u mikrobiološkoj analizi faringealnog eksudata i uzoraka iz nosa, posebno za otkrivanje asimptomatskih nosača S. aureus.
Neke su države primijenile ovu analizu kao obvezni zahtjev za ljude koji žele raditi kao dobavljači hrane.
Ova kontrola sprječava kontrakciju ljudi koji su nositelji S. aureus, čime se izbjegava masovno trovanje hranom, uslijed konzumiranja hrane kontaminirane stafilokoknim enterotoksinom.
Također se može uključiti u sjetvu infekcija rana, krvnih kultura, CSF-a, bronhoalveolarnog ispiranja, između ostalog.
Soljeni manitolni agar koristan je za ponovnu izolaciju kolonija iz urinskih kultura iz CLED agar ili krvni agar čiji je Gram otkrio gram-pozitivne nakupine koka.
Također vrijedi za mikrobiološku analizu hrane, pitke vode, tla, između ostalih primjena.
QA
Nakon što je pripremljena serija tanjura sa slanim manitolskim agarima, preporučljivo je izvršiti kontrolu kvalitete. Kontrolni sojevi se siju kako bi se pokazalo da li postoji rast ili ne.
Poznati sojevi Staphylococcus aureus mogu se upotrijebiti kao pozitivna kontrola. Trebao bi na zadovoljavajući način rasti žutim kolonijama, a medij također okreće istu boju.
Isto tako, prikladno je uključiti poznati soj Staphylococcus epidermidis. Trebao bi razviti zadovoljavajući razvoj ružičastih kolonija, a medij ostaje iste boje ili potamni do jače ružičaste.
Kao negativna kontrola koriste se sojevi koji na tom mediju ne bi trebali rasti. Na primjer, može se uzgajati poznati soj Escherichia coli ili Klebsiella pneumoniae. Očekivani rezultat je potpuna inhibicija, odnosno nema rasta.
Uz to se mora inkubirati neinokulirana pločica. U njemu ne bi trebalo biti rasta ili promjene boje.
Važno je da se ploča ne koristi ako postoje znakovi propadanja, poput onečišćenja, dehidracije, promjene boje, između ostalog.
Završne misli
Kada koristite medij slanog manitola agar, treba uzeti u obzir neke važne aspekte:
- Dobivanje porasta žutih kolonija ne znači da je riječ o Staphylococcus aureus. Treba imati na umu da su neki sojevi Enterococcusa sposobni rasti u ovom mediju i fermentirajući manitol, kao i određeni Gram-pozitivni štapovi koji stvaraju spore.
Stoga je važno napraviti Gram na koloniji i test na katalazu.
- S druge strane, mora se uzeti u obzir da su i druge vrste stafilokoka, osim aureusa, sposobne fermentirati manitol. Stoga je važno subkultivirati koloniju hranjivom hranom koja će se uzeti odatle i izvršiti test koagulaze.
Među vrste Staphylococcus kliničkog značaja za čovjeka koji fermentiraju manitol su: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, između ostalih.
Drugi mogu dati promjenjivu reakciju, tj. Ponekad pozitivnu, a ponekad negativnu. Neki su S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, između ostalih.
-Ne preporučuje se uzimanje kolonija izravno iz manitol agara za provođenje testa koagulaze jer visoka koncentracija medija u mediju može utjecati na rezultat.
-Na kraju, preporučuje se inkubiranje ploča zasađenih sa slanim manitolom do 48 sati, jer neki sojevi S. aureus mogu polako fermentirati manitol, iako to nije vrlo često.
Reference
- Britannia Laboratories. Slani manitarni agar. 2015. Dostupno na: britanialab.com
- "Slani manitol agar". Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 31. listopada 2018, 19:08 UTC. 17. siječnja 2019., 20.55, dostupno na: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
- BD Laboratoriji. BD manitol solni agar. 2013. Dostupno na: bd.com.