AGAR OD KUKURUZNOG BRAŠNA: POZADINA, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2025

Kukuruzno brašno agara je krutina medij kulture, niske prehrambene snage, korisni presađivanja određenih gljiva i demonstrirajući chlamydospores u sojevima Candida albicans kompleksa. Na engleskom je poznata kao kukuruzni obrok Agar.

Konvencionalni medij za kukuruznu brašno ima vrlo jednostavan sastav, sadrži kukuruznu brašno, agar-agar i vodu. Zbog niske hranjive razine, idealan je za korištenje u održavanju sojeva gljiva za umjerena razdoblja, posebno crnih gljiva.

A. Grafički prikaz kompleksa Candida albicans na agaru kukuruznog brašna. B. Klamidospore kompleksa Candida albicans koje se vide pod mikroskopom, formirane na agaru kukuruzne brašne. Izvor: A. GrahamColm / B. Napisao: CDC / Dr. William Kaplan, ljubaznošću: Biblioteka slika javnog zdravlja.

U ovom mediju favorizira se sporalizacija kompleksa Candida albicans, ako se tijekom pripreme agara dodaje 1% Tween 80. Tvorba klamidospora karakteristična je za ovu vrstu i praktički jedina koja utječe na ljude.

Postoje i druge vrste koje tvore klamidospore, ali malo je vjerojatno da će utjecati na ljude, poput Candida australis, prisutnih u izmetu pingvina, ili C. clausenii, što je rijetko saprofit. Isto tako, iznimno bi ih vrste C. stellatoidea i C. tropicalis mogle oblikovati.

S druge strane, dodavanje glukoze u medij s kukuruznim brašnom pogoduje stvaranju pigmenata u sojevima Trichophytom rubrum.

Važno je naglasiti da postoje gljive koje u agaru kukuruznog brašna ne stvaraju hife ili pseudohife, poput Cryptococcus neoformans, koje se razlikuju od drugih rodova.

Kukuruzni agar može se napraviti kod kuće u laboratoriju ili se mogu koristiti komercijalni mediji.

osnova

Kukuruzno brašno je supstrat, agar je sredstvo za učvršćivanje, a voda otapalo.

Kukuruzni agar može se nadopuniti s između 80 (sorbitan monooleat ili polisorbatni poliester 80). Ovaj spoj smanjuje površinsku napetost medija zbog svoje emulgirajuće moći.

Također stvara neprijateljsko okruženje koje inhibira pretjerano razmnožavanje stanica i potiče rast hifa, također favorizirajući proizvodnju klamidospora; potonji je smatrao strukture otpora. Ova struktura pomaže u identificiranju vrste Candida albicans.

Sa svoje strane, glukoza u ovom mediju povećava sposobnost stvaranja pigmenta nekih gljivica.

Treba napomenuti da medij kukuruzne brašne s glukozom nije koristan za demonstraciju klamidospora u kompleksu Candida albicans.

priprema

Priprema domaćeg kukuruznog agara

Izvažite 47 g žutog kukuruznog brašna i otopite u 500 ml destilirane vode. Zagrijati na 60 ° C, uz miješanje pripravka u trajanju od otprilike 1 sata. Zatim se filtrira kroz komad gaze i pamuka, opcionalno se može ponovno filtrirati dodavanjem preparata kroz filtrirni papir Whatman No.

Dopunite volumen do 1000 ml s destiliranom vodom. Dodajte 17 g agar-agara, zagrijavajte dok se ne otopi. Autoklavite 15 minuta na 121 ° C.

Poslužite u sterilnim Petrijevim posudama. Čuvati u hladnjaku.

Boja pripremljenog medija je bjelkasta s gnojnim izgledom.

Ako želite pripremiti kukuruzno brašno s glukozom gore opisanom pripravku, dodajte 10 g glukoze.

Komercijalni agar kukuruznog brašna

Odvažite 17 g dehidriranog medija i otopite u 1 litri destilirane vode. Smjesa se može zagrijati, lagano protresti da se potpuno otopi. Sterilizirajte u autoklavu na 121 ºC, na 15 lb, 15 minuta.

Ulijte u sterilne Petrijeve posude. Pustite da se stvrdne. Invertirajte i čuvajte u hladnjaku do upotrebe. Temper prije upotrebe.

PH bi trebala biti 6,0 ± 0,2 na 25 ° C.

Agar od kukuruznog brašna s Tween 80

U skladu s ISO 18416, agar kukuruzne brašne mora biti pripremljen kako slijedi:

Izmjerite 65 grama po litri i dodajte 10 ml Tween 80. Zagrijte i kuhajte nekoliko minuta dok se ne otopi, pazeći da se previše ne pregrije. Sterilizirajte na 121 ° C 15 minuta.

Agar od kukuruznog brašna s glukozom

Da biste poboljšali kromogenu snagu kolonija Trichophyton rubrum i razlikovali ih od T. mentagrophytes, u originalnu formulu može se dodati 0,2% glukoze. Ne morate imati Tween 80, jer glukoza inhibira stvaranje klamidospora.

Koristiti

Korištenje agara kukuruznih brašna uglavnom je namijenjeno ispitivanju sojeva Candida, pomažući njihovoj identifikaciji kroz karakteristično promatranje klamidospora kod albicansa. Odnosno, upotreba ovog agara služi kao pomoćna metoda identifikacije ovih kvasca.

Na ovom agaru mogu se razviti i saprofitne i patogene vrste, ali svaka formira karakteristične micelarne strukture. Na primjer, vrste roda Torulopsis ne stvaraju micelij i razmnožavaju se samo blastokonidijom.

Isto tako, vrste Trichosporon i Geotrichum proizvode artrokonidije na agaru kukuruznog brašna i ponekad je teško razlikovati jedno i drugo.

Arthroconidia iz roda Geotrichum proizvode produžetak hifa nalik na hokejski štap.

Također je proizvodnja pigmenata upotrebom agara kukuruznog brašna sa glukozom korisna za identifikaciju Trichophytom rubrum.

sije

Sumnjive kolonije Candida dobivene u mediju primarne kulture - Sabouraud agar - iz kliničkih uzoraka, kozmetike, tla, među ostalim, subkultivirane su na agaru kukuruznog brašna. Medij se sadi i inkubira tokom 24 do 48 sati na 22 ° C. Vrijeme inkubacije može se produžiti ako je potrebno.

Demonstracija klamidospore

U tu svrhu agar kukuruznog brašna s Tween 80 mora se inokulirati tehnikom Dalmau. Ova metoda sastoji se od uzimanja dijela sumnjive kolonije platinastom ručkom i izrade tri paralelna reza u sredini, držeći držač na 45 °. Rezovi trebaju biti odvojeni na udaljenosti od 1 cm jedan od drugog.

Nakon toga, prethodno zapaljeni pokrovni objekt postavlja se na posijane pruge, na način da je polovina prekrivena, a drugi bez pokrića.

Inkubirajte zasijane ploče na 30 ° C 48-72 h, a zatim pregledajte pod mikroskopom kroz poklopac.

Održavanje sojeva gljivica

Za održavanje sojeva, zasađeni i uzgojeni tanjuri čuvaju se u hladnjaku (4 do 8 ºC). Na taj način mogu trajati nekoliko tjedana i biti korišteni u nastavne ili istraživačke svrhe.

QA

Za kontrolu sterilnosti ploča se inkubira bez inokulacije na sobnoj temperaturi, očekuje se da neće doći do rasta ili promjene boje.

Za kontrolu kvalitete mogu se sijati poznati sojevi kao što su: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Očekivani rezultati su djelomična inhibicija za S. aureus i E. coli. Dok se očekuje zadovoljavajući rast u ostatku sojeva.

Aspergillus niger raste s crnim i sporuliranim kolonijama u približnom vremenu inkubacije od 5 dana.

Kolonije kvasca Candida albicans s proizvodnjom klamidospora.

Saccharomyces cerevisiae proizvode velike stanice kvasca.

Ograničenja

Na dnu ploče formira se žuti talog koji se ne smije miješati s kolonijama.

Reference

1. Neogeni laboratoriji. Kukuruzni obrok Agar. Dostupno na: foodsafety.neogen.com.
2. Microkit Media Media. Kukuruzni obrok Agar. Dostupno na: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Vodič za identifikaciju kvasca Solís F. Dostupno na: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. vlč. Perú Med.Exp. Javno zdravlje, 2002.; 19 (4): 206-208. Dostupno na: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Opća mikologija. 1994. Drugo izdanje Središnjeg sveučilišta u Venezueli, izdanja biblioteka. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Usporedna studija nekih makro i mikroskopskih metoda za izolaciju i prepoznavanje roda Candida. Kolumbijski vlč. Farmaceutskih kemijskih znanosti. 1970; 3 (1): 33-57. Dostupno na: Ciencias.unal.edu.co