ŽUTI ESKARSKI AGAR: OBRAZLOŽENJE, PRIPREMA I UPOTREBA - BIOLOGIJA - 2026

Žučne eskulin agara je selektivni i diferencijal medij kulture krutina. Koristi se kao dijagnostički test za utvrđivanje sposobnosti određenog mikroorganizma da raste u mediju koji sadrži žuč, a također razgrađuje glukozid eskulina na eskuletin i glukozu.

Ovaj dijagnostički test koristi se za razlikovanje vrsta roda Streptococcus iz skupine D (žučni eskulin pozitivni), od ostalih skupina Streptococcusa koji negativno reagiraju na ovaj test.

Ploča sa žutim esculinskim agarima, zasađena je sojem Enterococcus (test pozitivan). Izvor: Nije naveden autor čitljiv autor. Philippinjl pretpostavlja (na temelju tvrdnji o autorskim pravima).

Treba napomenuti da neki Streptococcus iz skupine viridans mogu hidrolizirati eskulin, ali nisu sposobni rasti u prisutnosti žuči u koncentraciji od 40%, stoga je u ovom mediju reakcija za ovu skupinu negativna.

S druge strane, žučni eskulinski medij koristan je i za dijagnozu vrste Listeria monocytogenes ili Aerococcus sp, budući da su ti mikroorganizmi pozitivni na žučni esculin.

Esculin Bile Agar sastoji se od peptona, ekstrakta mesa, oks žuči, eskulina, željeznog citrata, agara i destilirane vode. Neke komercijalne kuće uključuju natrijev azid u sastavu medija.

Medij se može pripremiti u laboratoriju ako imate sve spojeve odvojeno ili se može pripremiti iz komercijalnog dehidriranog medija.

osnova

Žučni eskulinski medij sadrži peptone i ekstrakt mesa, a oba spoja osiguravaju potrebne hranjive tvari za rast mikroorganizama.

Sadrži i esculin; Ovaj spoj je glukozid nastao sjedinjenjem jednostavnog monosaharida (glukoze) sa spojem zvanim 6,7-dihidroksikarmarin ili eskuletin (aglukon), povezan acetalnom ili glukozidnom vezom.

Test se temelji na tome da li je bakterija sposobna hidrolizirati eskulin. Ako se to dogodi, esculin se razgrađuje na eskuletin i glukozu. Esculetina reagira s željezom prisutnim u mediju, tvoreći tamno smeđi, gotovo crni spoj.

To znači da feritni citrat djeluje kao pokretač reakcije. Ova karakteristika čini Bile Esculin Agar diferencijalnim medijem.

Sa svoje strane, žuč je inhibitor koji sprečava rast nekih mikroorganizama, stoga bakterija, prije cijepanja eskulina, mora biti u stanju rasti u žuči. Stoga se ovaj medij smatra selektivnim.

Bakterije koje se mogu razvijati u ovom okruženju uglavnom su one koje žive u crijevnom okruženju.

U tom smislu, neke komercijalne tvrtke dodaju natrijev azid u medij da dodatno inhibiraju rast enteričkih Gram negativnih bacila, povećavajući selektivnost medija za rast streptokoka.

Konačno, agar daje čvrstu konzistenciju mediju, a voda je otapalo spojeva.

priprema

Domaća priprema žućnog eskulinskog agara

Težiti:

5 g peptona

3 g ekstrakta mesa

40 g goveđe žuči

1 g esculina

0,5 g željeznog citrata

15 g agar

1000 ml destilirane vode

U slučaju dodavanja natrijevog azida, izvaže se 0,25 g / litra i doda se u smjesu.

Otopite komponente u litri destilirane vode, zagrijavajte se dok se spojevi potpuno ne otope. Raspodijelite 5 ml u epruvete s vijcima veličine 16 x 125 mm. Autoklavite na 121 ° C, 15 kilograma pritiska 15 minuta.

Uklonite iz autoklava i nagnite cijevi na nosač, tako da se agar očvrsne u širokom kljunu flaute.

Čuvajte u hladnjaku do upotrebe. Dovedite na sobnu temperaturu prije sjetve.

Također se mogu pripremiti ploče sa žutim esculinskim agarima; u ovom se slučaju cijela smjesa autoklavira u tikvicu i nakon toga distribuira u sterilnim Petrijevim posudama. Ostavite ih da se stvrdne i čuvajte u hladnjaku.

PH sredstva mora biti 6,6 ± 0,2.

Priprema žučnog eskulinskog agarja iz komercijalnog medija

Izmjerite količinu određenu umetkom. To se može razlikovati od jedne poslovne kuće do druge. Nakon toga postupite prema gore opisanom postupku.

PH sredstva treba biti 6,6 ± 0,2. Boja dehidriranog medija je svijetlo bež, a pripremljeni medij je tamno jantarna.

Komercijalni medij eskulina žuči. Izvor: Fotografiju snimio autor MSc. Marielsa Gil.

Prijave

Žučni eskulinski medij koristi se uglavnom za razlikovanje Streptokoka iz skupine D (žučni eskulin pozitivan), od ostalih streptokoknih skupina (negativnih eskulina na žuč).

Kombinacijom testa rasta hipersoliranog bujona s testom žučnog eskulina može se identificirati posebna skupina streptokoka iz skupine D nazvana Enterococcus.

Ova posebna skupina streptokoka pripada skupini D gore spomenutog roda i sposobni su hidrolizirati eskulin u prisutnosti žuči kao i ostali članovi grupe D, ali mogu se razvijati i u hipersoliranom mediju (BHI s kloridom od 6,5% natrija), svojstvo koje razlikuje.

Stoga se streptokoki koji hidroliziraju eskulinsku žuč, ali ne rastu u hipersoliranom bujonu, nazivaju streptokoki grupe D koji nisu enterokoki.

sije

Medij inokulirajte, po mogućnosti iz čistog Todd-Hewitt 24-satnog juha.

Dodajte 2 kapi na površinu medija pasterovom pipetom i raširite u mediju platinastom petljom.

Inkubirajte 48 sati na 35 ° C, dok je vrijeme inkubacije ispunjeno, može se pratiti da li postoji pozitivna reakcija. Ako na kraju vremena reakcija ostane negativna, može se inkubirati najviše 72 sata.

Tumačenje

Pozitivna reakcija: pojava tamno smeđe, gotovo crne boje u kljunu flaute (u slučaju ispitivanja epruvete) ili crnjenje agusa oko kolonija (u slučaju testa s pločom).

Negativna reakcija: ne nastaje crnjenje medija ili postoji pojava crne boje u manje od polovice epruvete nakon 72 sata inkubacije. S druge strane, rast bakterija u mediju bez pojave crne boje treba smatrati negativnim testom.

QA

Za procjenu kvalitete medija, Enterococcus faecalis ATCC 29212 soj mora biti dostupan kao pozitivna kontrola, a soj Streptocococus koji ne pripada skupini D kao negativna kontrola.

Ograničenja

-Medija koja ne sadrži natrijev azid omogućuje rast enteričkih Gram negativnih bacila. Neki od njih mogu crniti sredinu.

- Neke komercijalne kuće dodaju nisku koncentraciju žuči (10%) i zbog toga se u medijumu može razviti streptokok koji ne pripada skupini D i hidrolizirati eskulin, što može stvoriti pogreške u interpretaciji.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiološka dijagnoza. 12 ed. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija kliničkog značaja. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratorij, Britannia. Esculinska žuč s azidnim agarima. 2015. Dostupno na: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 22. kolovoza 2017., 17:30 UTC. 22. travnja 2019., 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Dostupno na: bd.com
7. Neogeni laboratoriji. Bile esculinski agar. Dostupno na: foodsafety.neogen.com