BAIRD PARKER AGAR: TEMELJ, PRIPREMA I UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar Baird Parker je krutina medij selektivan i diferencijal kulture. Stvorena je 1962. za otkrivanje i brojanje stafilokoka pozitivnih na koagulaze (Staphylococcus aureus).

Sastoji se od hidrolizata pankreasa kazeina, ekstrakta mesa, ekstrakta kvasca, litijevog klorida, glicina, natrijevog piruvata, kalijevog telurita, agarja i emulzije žumanjaka.

Tipične kolonije stafilokoka aureusa na agaru Baird Parker. Izvor: Daizy John

Baird Parker Agar zasnovan je na sposobnosti S. aureusa da smanjuje telurit i proizvodi lecitinazu. Oba svojstva stvaraju koloniju s specifičnim karakteristikama za ovu vrstu. Stoga je vrlo učinkovit u otkrivanju ovog mikroorganizma.

Tipične kolonije S. aureus su crne ili tamno sive boje, bezbojne obrube i svijetlog haloa koji ih okružuje, što ih razlikuje od ostalih mikroorganizama. Taj se patogen može naći u kliničkim uzorcima, vodama, kozmetici i sirovoj ili kuhanoj hrani.

Njegova dijagnoza ili otkrivanje je od najveće važnosti, zbog različitih patologija koje proizvodi, poput trovanja hranom, sindroma prosipane kože, sindroma toksičnog šoka, apscesa, meningitisa, septikemije, endokarditisa, među ostalim.

osnova

Hranjiva snaga

Pankreasni hidrolat kazeina, ekstrakta mesa i ekstrakta kvasca izvor su hranjivih tvari, vitamina i minerala potrebnih za opći razvoj mikroba, dok su piruvat i glicin spojevi koji pogoduju specifičnom rastu Staphylococcus aureus.

selektivan

Baird Parker Agar je selektivan jer sadrži tvari koje inhibiraju rast prateće flore, istovremeno promičući razvoj S. aureus. Inhibicijski spojevi su litijev klorid i kalijev telurit.

Diferencijal

Ovaj medij omogućuje razlikovanje S. aureus od ostatka stafilokoka negativnih koagulaze. S. aureus ima sposobnost reduciranja telurita u slobodni metalni crni telur, tvoreći crne ili tamno sive kolonije.

Isto tako, žumanjak daje supstrat da dokaže prisutnost enzima lecitinaze i lipaze. S. aureus je pozitivan na lecitinazu i zbog toga će se uočiti jasan halo oko kolonije, što ukazuje da je lecitin hidroliziran.

U tom smislu pojava na ovom agaru sjajnih crnih ili tamno sivih kolonija sa svijetlim oreolom oko njih ukazuje na prisustvo S. aureus.

Ako se formira zona oborina, to pokazuje da je aktivnost lipaze. Neki sojevi S. aureus su lipazni pozitivni, a drugi negativni.

U slučaju da je S. aureus pozitivna na lipazu, uočit će se neprozirno područje oko kolonije crne ili tamno sive boje, a zatim svjetlo halo zbog djelovanja lecitinaze.

Kolonije bakterija osim S. aureus sposobne da rastu na ovom mediju razvit će bezbojne ili smeđe kolonije bez okole.

Atipične crne kolonije također se mogu vidjeti sa ili bez bezbojne obrube, ali bez svijetlog haloa. Te kolonije ne treba uzimati u obzir, ne odgovaraju S. aureusu.

priprema

Emulzija jajećeg žumanjka

Uzmite svježe pileće jaje, dobro ga operite i stavite u 70% alkohol na 2 do 3 sata. Jaje se zatim aseptično otvara i bijelo se pažljivo odvoji od žumanjka. Nakon toga uzme se 50 ml žumanjka i pomiješa se sa 50 ml sterilne fiziološke otopine.

Kalijev telurit 1% w / v

Neke komercijalne kuće prodaju 1% kalijev telurit spreman za upotrebu. Dodaje se mediju prije nego što se očvrsne.

Da bi se ta otopina pripremila u laboratoriju, izvadi se 1,0 g kalijevog telurita i otopi se u jednom dijelu vode. Nakon toga, količina vode se dovrši sve dok ne dosegne 100 ml. Otopina se mora sterilizirati metodom filtracije.

Priprema medija za kulturu

Odmjerite 60 g dehidriranog medija i otopite u 940 ml destilirane vode. Ostavite da smjesa sjedi oko 5-10 minuta.

Primijenite toplinu miješajući medij kako biste poboljšali postupak otapanja. Dovedite kuhati minutu. Sterilizirajte u autoklavu na 121 ° C 15 minuta.

Ostavite da stoji dok ne postigne temperaturu od 45 ° C i dodajte 50 ml emulzije žumanjka i 10 ml 1% telurita. Dobro promiješajte i ulijte 15-20 ml u sterilne Petrijeve posude.

Ostavite da se očvrsne, narežite na ploče i pohranite u hladnjak do upotrebe.

Konačni pH pripremljenog medija mora biti 6,8 ± 0,2.

Prije sadnje uzorka, pričekajte da ploča dosegne sobnu temperaturu. Posadite ploče vađenjem ili površinskim setvom Drigalski lopaticom.

Boja dehidriranog medija je svijetlosmeđa, a boja pripremljenog medija svijetlo žuta.

Koristiti

Klinički uzorci

Klinički uzorci se siju izravno, ispuštajući dio materijala na jedan kraj ploče, a odatle se iscrpljuje od iscrpljenosti. Inkubirajte 24 do 48 sati na 35-37 ° C.

Uzorci hrane

Odvažite 10 gr uzorka hrane i homogenizirajte u 90 ml 0,1% vode peptona, odatle se po potrebi pripreme razrjeđenja. Pločice inokulirajte u tri primjerka s 0,3 ml pripremljenih otopina i stavite na površinu sjemenkom Drigalski. Inkubirajte 24 do 48 sati na 35-37 ° C.

Ova metodologija omogućava brojanje dobivenih tipičnih kolonija i idealna je kada se sumnja na prisustvo S. aureus iznad 10 CFU po g / ml uzorka.

Ako se sumnja da je količina S. aureus mala ili postoji puno prateće flore, predlaže se uzorak obogatiti u sojinoj juhi tripticaze 10% NaCl i 1% natrijevog piruvata. To će poticati rast S. aureus i inhibirati razvoj prateće flore. Muljene cijevi sjeme su na agaru Baird Parker.

Uzorci vode

U sterilisanom sustavu vakuumske filtracije filtrira se 100 ml vode za proučavanje, a zatim se sterilnim pincetama odstranjuje 0,4 mikrona mikroporozna membrana i postavlja se na Baird Parker ploču. Inkubirajte 24 do 48 sati na 35-37 ° C. Ova tehnika omogućuje brojanje tipičnih kolonija S. aureus.

QA

Poznati sojevi poput Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ili Proteus mirabilis ATCC 43071 mogu se koristiti za procjenu kvalitete Baird Parker agar.

U slučaju sojeva S. aureus ATCC, poznato je da smanjuju telurit, a oni su pozitivni na lipazu i lecitinazu. Stoga mora postojati zadovoljavajući razvoj i rasti konveksne kolonije s crnim središtem i bezbojnom obrubom, s neprozirnim halo i laganim vanjskim oreolom.

Očekuje se da će se S. epidermidis na ovom mediju slabo razvijati, sa sivo-smeđim do crnim kolonijama, bez svijetlog haloa.

Za E. coli i P. mirabilis očekuje se da ih potpuno ili djelomično inhibira. U slučaju rasta, razvit će se smeđe kolonije bez neprozirnog područja ili lagane haloge.

preporuke

-Srednja ne treba zagrijavati nakon dodavanja telurita i žumanjka.

-Priprema emulzije žumanjaka i dodavanje u sredini vrlo je ranjiv korak za kontaminaciju. Morate biti izuzetno oprezni.

-Ako postoji prisutnost tipičnih kolonija S. aureus, to treba potvrditi postavljanjem testa koagulaze na navedeni soj.

-Ako postoje sumnjivi rezultati s koagulazom, potrebno je uspostaviti druge potvrdne testove.

- Pazite da prisutnost tipičnih kolonija S. aureus ne zbunite s atipičnim crnim kolonijama.

Reference

1. Suradnici na Wikipediji. Baird-Parker agar. Wikipedia, Slobodna enciklopedija. 15. ožujka 2017., 19:36 UTC. Dostupno na: wikipedia.org/ Pristupljeno 18. veljače 2019. godine.
2. BD Laboratoriji. Baird Parker Agar. 2006. Dostupno na: bd.com
3. Britannia Laboratories. Baza agar Baird Parker. 2015. Dostupno na: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Dostupno na:
5. Britannia Laboratories. Kalijev telurit. 2015. Dostupno na: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carriage of enterotoxigenic Staphylococcus aureus tip A, u nazofaringealnim razmazima u hranilicama. Rev Med Čile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelanski standardni Covenin 1292-89. (1989). Hrana. Izolacija i nabrajanje Staphylococcus aureus. Dostupno na: sencamer.gob.ve